왜 엘리사를 확인하는 데 웨스턴 블롯을 사용합니까? + 예제

왜 엘리사를 확인하는 데 웨스턴 블롯을 사용합니까? + 예제
Anonim

대답:

일반적으로 항체 특이성 검사입니다.

설명:

ELISA에서는 항체가 관심 단백질, 전혀 다른 단백질 또는 다양한 단백질에 결합하는지 여부를 알기가 매우 어렵습니다.

서양 얼룩은 항체의 특이성을 검사하는 데 사용됩니다 (서양 얼룩은 잘못된 단백질과의 모든 교차 반응을 감지하지 못할 수 있습니다).

웨스턴 블랏에서는 항체가 결합하는 단백질의 크기를 볼 수 있습니다 (ELISA에서는 불가능합니다). 따라서 예를 들어 항체가 56 kDa의 단백질에 결합해야하고 약 56 kDa의 밴드가 보이면 항체가 올바른 단백질에 결합한다는 사실을 합리적으로 확신 할 수 있습니다.

반면에 32kDa에서 밴드를 발견하면 항체가 잘못된 단백질에 결합한다는 결론을 내릴 수 있습니다. 마찬가지로, 많은 밴드가 서양 얼룩에 나타나면 항체가 다양한 단백질의 범위에 결합한다는 것이 단백질 분해가없는 경우에 나타납니다.

겔 및 다중 밴드에 나타나는 32 kDa 밴드의 예에서, 항체는 ELISA에 대한 특이성이 결여되고, ELISA에서 관찰 된 모든 결과가 관심있는 단백질에 특이 적이 아닐 수도 있음을 암시한다.

제가 이런 종류의 검사를 받았다면 항체를 시험하기 위해 일종의 "방해하는"시약을 포함시킬 수 있습니다. 예를 들어, 항체를 펩타이드에 올린 경우 정확한 결합을 테스트하기 위해 펩타이드를 1 차 항체 용액에 포함시킬 수 있습니다. 즉, 펩타이드가 존재할 때 펩타이드가 과도하게 존재하기 때문에 일차 항체가 결합 할 수 없으므로 ELISA 결과가 나타나지 않습니다.