대답:
많은…
설명:
밴드가 서양 가재에 나타나지 않는 데에는 여러 가지 이유가 있습니다. 과거에 샘플과 항체 조합을 사용 했습니까?
아래는 밴드가 나타나지 않도록 내가 생각할 수있는 몇 가지 예입니다.
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단백질이 젤에서 옮겨 졌습니까? 밴드가 존재하는지 확인하기 위해 ponceau S 또는 amido black과 같은 것으로 막을 염색 해보십시오. 때로는 멤브레인을 젖게하고 빛에 비스듬하게 유지하여 단백질 밴드를 볼 수 있습니다.
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1 차 항체가 작동합니까? 이것은 테스트하기가 힘든 것이며, 관심있는 단백질이 있다는 것을 알고있는 곳에 긍정적 인 컨트롤을 포함시킴으로써 가능한 유일한 방법입니다. 관심있는 단백질이 있다면 웨스턴 블로 팅 멤브레인 (예: 젤을 사용하지 마십시오)에 부착하여 서양 블롯 인 것처럼 막을 처리하면 결과를 얻는 지 확인할 수 있습니다.
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2 차 항체가 1 차 항체를 인식하고 있습니까? 다시 한 번 시험하기에 어려운 것입니다. 당신이 할 수있는 유일한 테스트에 대해서는 2에서 언급 한 현장 테스트입니다.
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"감지 시스템"이 작동하고 있습니까? 사용하는 검출 방법에 따라 2 차 항체의 일부에서 스파이크를 시도하여 2 차 항체의 검출 제 및 효소를 유발하는지 확인할 수 있습니다. 즉, 2 차 항체와 반응을 일으킬 수 있습니까?
마지막으로, 플롯의 프로빙 중에 잘못 사용 된 솔루션 중 하나가 간단 할 수 있습니다. 예를 들어, 염 농도가 완충액에서 잘못되면 항체가 오물에서 방출 될 수 있습니다. 버퍼의 pH가 올바르지 않은 경우에도 마찬가지입니다.
내가 개인적으로 경험 한 웨스턴 블롯에 대한 "가장 이상한"원인은 우리가 멤브레인을 막기 위해 사용했던 분유 공급 업체를 변경했을 때였 다. 새로운 공급 업체의 파우더에는 항 포스 포 티로신 항체로 검출하려는 모든 인산염 그룹을 제거한 포스 포 티로신 포스파타제가 포함되어있었습니다.
패턴 12,23,34,45,56이 순열에 나타나지 않도록 1,2,3,4,5,6의 순열의 수는?
(6!) / (4!) = 30 12,23,34,45,56은 5 순열입니다. 그래서 : (6!) / (4!) - 5 = 25
계보의 최근 부분에 나타나는 특징은 무엇입니까? 그러나 나이가 많은 구성원에는 나타나지 않는 특징은 무엇입니까?
조상의 특징. 몇 가지 가능한 용어가 있지만, 이것은 좀 더 일반적이고 포괄적 인 용어 중 하나입니다.
웨스턴 블 롯팅이란 무엇입니까?
SDS-PAGE에 의해 분리 된 다음 멤브레인으로 옮겨진 단백질을 검출하는 것은 항체의 사용입니다. 세포는 단백질 (수천)의 혼합물을 함유하고 있으며 이들은 SDS-PAGE로 분리 될 수 있습니다. 그런 다음 SDS-PAGE의 단백질을 전기장을 사용하여 젤에서 멤브레인 (일반적으로 니트로 셀룰로오스 또는 폴리 비닐 리덴 플루오 라이드 (PVDF))으로 옮깁니다. 막은 목적 단백질에 특이적인 1 차 항체로 프로빙된다. 그런 다음 2 차 항체를 사용하여 1 차 항체를 검출합니다. 2 차 항체는 화학 반응에 의해 검출 될 수있는 마커를 포함하여 멤브레인에 가시적 인 밴드를 제공하거나 특수 카메라로 캡처 할 수있는 신호를 포함합니다. 필요하다면 필자는 커리어 동안 수백 개의 웨스턴 블롯을 수행 했으므로이 답변을 아주 깊이 확장 할 수 있습니다.