왜 PCR에서 음성 대조군을 사용합니까?

왜 PCR에서 음성 대조군을 사용합니까?
Anonim

대답:

아래 참조

설명:

PCR은 주형 DNA에서 작동합니다. HIV에 대한 테스트를하고 있다고 가정 해 봅시다. (HIV는 RNA 바이러스이지만 세포에 들어가면 DNA로 전환되어 감염된 세포에 HIV DNA가있게됩니다). 당신이 사용하는 프라이머는 HIV DNA의 일부분에 해당하는 생성물 (amplicon)을 만들 것입니다. 이 amplicon을 보면 HIV 서열이 있습니다 …..하지만 음성 대조군이 없다면 오염되었을 수 있습니다.

PCR은 매우 엄격합니다. PCR (물, 완충액, dNTPs, 효소)에 사용되는 많은 솔루션이 있으며, 이들 모두는 다른 샘플 또는 심지어 어제 반응으로 생성 된 앰플 리콘의 DNA로 쉽게 오염 될 수 있습니다. 따라서 환자 X의 DNA 샘플을 가지고 있고 PCR로 HIV를 검사하는 경우 PCR 프라이머는 환자 X의 DNA 샘플 (해당 사람이 HIV를 가지고있는 경우)에서 HIV DNA를 생성하지 못하게하거나 오염. 그러나 그것이 환자 DNA에서 오염되었거나 HIV에서 왔는지 알 수 없습니다.

그래서 당신은 물 컨트롤을 실행합니다. 튜브 1에서는 반응의 모든 구성 요소를 배치하고 DNA의 경우 물만 추가합니다. 이것은 부정적인 통제입니다. 아무것도 증폭하지 않아야합니다. 튜브 2에서는 모든 반응 성분과 환자 X의 DNA를 넣습니다. 여기에 제품이 있다면 (튜브 1에는 아무 것도 없음), 환자 X는 아마도 자신의 DNA에 HIV DNA를 가지고있을 것입니다. 튜브 1과 튜브 2에서 제품을 얻는다면 오염 문제가 있으며 환자의 샘플에 들어있는 HIV가 질병이나 오염에 의한 것인지 알 수 없습니다.

그래서 당신은 항상 물 컨트롤 (DNA 대신 물)을 실행합니다.